Pylová zrna 3D konfokální rekonstrukce

Tenhle snímek bude asi mnohem koukatelnějí a zajímavější než jen "obyčejné" buňky. Preparát jsem nedělal, byl zapůjčen Nikonem při testování nového systému na jaře. Jde o pylová zrna lile v prašnících - je to preparát trvalý, fixovaný. Snímáno cca 30 konfokálních řezů o celkové tloušťce 24 µm. Jde o prostorovou projekci. Doostřeno Gauss-Laplaceho metodou. Tentokrát není snímáno sCMOS kamerou ve fluorescenčním módu, ale GaAsP detektory v módu konfokálním.

Jen zjedodnušeně rozdíl mezi fluorescenční a konfokální mikroskopií:
Ve fluorescenci je zdrojem záření výbojka nebo jiný zdroj spojitého záření (u nás CoolLED diodový zdroj). Světlo prochází excitačním filtrem, vzorkem, objektivem, dichroickým zrcátkem a emisním filtrem ke kameře (většinou CCD, u nás sCMOS).
U konfokální mikroskopie jsou zdrojem záření lasery o určitých vlnových délkách. Světlo jde na vzorek a z něho přes objektiv, dichroické zrcátko a emisní filtr na detektor.

Vzorek je skenován lasery (proto CSM = confocal scanning microscopy) - tzn. není snímán jako celek určitý čas najednou, jako kamerou, ale jakoby se "načítá" po řádcích.
Výhodou konfokální mikroskopie je, že zatímco u fluorescenční mikroskpie vidíme ("svítí") i struktury mimo rovinu zaostření, tak u konfokálu díky pinhole vše out-of-focus neprojde na detektor.

U snímku jsem zachoval hodnoty velikosti snímané oblasti v levém spodním roku.

Pro ilustraci, jak takový foťák vypadá:
http://portal.faf.cuni.cz/getattachment/Groups/Molecular-and-Cellular-Toxicology-Group/Equipment/PTX_1537_PS.JPG.aspx

Hádejte jakým objektivem je foceno ;) (zelené světlo je od FITC fluorescence)
http://portal.faf.cuni.cz/getattachment/Groups/Molecular-and-Cellular-Toxicology-Group/Equipment/PTX_1533_PS.JPG.aspx